El reemplazo de la prueba biológica con ratones por el qPCR para el diagnóstico de rabia

Contextualización sobre

la rabia La rabia es una zoonosis a la que no se le da la importancia que se debería 1. Es una encefalitis de origen viral, aguda y progresiva, provocada por un Lyssavirus de la familia Rhabdoviridiae que provoca daños en el sistema nervioso de los mamíferos 2. La rabia es considerada una enfermedad 100% letal y se encuentra presente en todos los continentes. En países en desarrollo, miles de personas mueren anualmente debido a esta encefalitis viral, estimándose en 56.000 el número de óbitos anuales 1.

En Brasil existen hoy pocos casos por año de muertes humanas. Entre el año 2010 y 2018 hubo 36 casos de óbito en el país, de los cuales sólo 9 tuvieron al perro como animal agresor 3. Lo que ha favorecido la reducción de casos humanos es la menor circulación de variantes caninas del virus, así como una mayor concientización de las personas en relación al riesgo de contacto con animales sospechosos. Otro factor importante para el control de la rabia ha sido el monitoreo de la circulación viral en los ambientes rurales, urbanos y silvestres, a través de la vigilancia laboratorial de los animales sospechosos 3.

Breve historia del diagnóstico de rabia animal en Lacen, Estado de Paraná, Brasil

El Laboratorio Central del Estado de Paraná (Lacen/PR) cumplió 125 años de existencia el día 21 de diciembre de 2019, el segundo laboratorio más antiguo del país. En él se han realizado innumerables exámenes de diagnóstico de los más variados y complejos, entre los que se cuenta el diagnóstico de rabia animal, que forma parte del Programa de Vigilancia de Rabia del Estado de Paraná.

El servicio de diagnóstico de rabia del Lacen ha recibido en los últimos años un promedio de 4.000 muestras por año. Estas muestras son de perros y gatos sospechosos de rabia y de otros mamíferos silvestres que se han encontrado muertos dentro del estado de Paraná, con un alto porcentaje de muestras de murciélagos. Hasta mediados de 2019, este laboratorio realizaba dos pruebas diagnósticas, de acuerdo a las recomendaciones del «Manual de Diagnóstico Laboratorial de Rabia» del Ministerio de Salud 4 .

Una de ellas era la inmunofluorescencia directa (IFD), un método de referencia tanto para el nombrado Ministerio como para la Organización Mundial de la Salud (OMS) 5. Además de la IFD, también se realizaba el aislamiento viral en ratones (prueba biológica) que aún se considera como un método de referencia 4.

La OMS recientemente ha aceptado al qPCR (reacción en cadena de polimerasa en tiempo real) como una técnica válida para el diagnóstico post mortem de rabia en animales 5 . A partir de las enormes ventajas que posee este método frente a las otras técnicas (IFD, prueba biológica y aislamiento viral en cultivo celular), el Lacen decidió implantar esta metodología. Además, las características de manejo en biología molecular del Lacen y los equipos necesarios para realizar el PCR en tiempo real han permitido validar la técnica e implantar el servicio diagnóstico de rabia animal del laboratorio.

Validación de la técnica de qPCR

Antes de comenzar a utilizar la técnica de qPCR en el laboratorio del servicio de diagnóstico de